Дополнительные диагностические исследования
Собак, находившихся в эндемичных по бруцеллезу районах, необходимо исследовать на инфекцию Brucella canis, что является рутинной составной частью оценки плодовитости, даже если ранее проведенные тесты дали отрицательный результат. Особенно важно проведение такого исследования, если, по данным анамнеза, в питомнике, где содержится кобель, регистрировали гибель эмбрионов или аборты, или если кобель подвергался реальному риску заражения бруцеллами (5). Вследствие коварного характера инфекции В. canis и расширения международных перевозок спермы собак возможен ее непредвиденный занос в питомники даже тех стран, которые считаются благополучными по ней. Если у кобеля диагностировали бруцеллез, то необходимости в дальнейшем обследовании его репродуктивной функции нет, но для сохранения за питомником статуса племенного целесообразно проведение эпизоотологического исследования.
Необходимо установить причину нарушений, выявленных при клиническом обследовании. Количество форменных элементов крови, биохимические параметры сыворотки крови и результаты анализа мочи позволяют оценить общее состояние здоровья собаки. Однако при отсутствии клинических нарушений или явных признаков болезни мало шансов установить причину бесплодия. Обычно рекомендуют проведение скрининга кобелей, проявляющих бесплодие, на гипотиреоидизм. Между тем при экспериментально индуцированном гипотиреоидизме либидо, величина тестикулов, образование спермы и ее качество, а также концентрация тестостерона и лютеинизирущего гормона в сыворотке крови взрослых кобелей не претерпевают изменений (6). УЗИ - прекрасный метод дальнейшего изучения любых отклонений от нормы, выявленных при пальпации мошонки, семенного канатика, тестикулов и их придатков. Этот метод дает значительно более ценную в диагностическом плане информацию о состоянии предстательной железы, чем пальпация (7). Заболевания предстательной железы часто становятся причиной бесплодия. С помощью проводимой под контролем УЗИ аспирации через тонкую иглу проб тестикулов и предстательной железы из пораженных участков этих органов можно легко получить пригодный для исследования материал. Пробы полученных этим методом тканей подвергают цитологическому и бактериологическому исследованиям.
При отсутствии клинических или поведенческих объяснений слабого либидо проводят наблюдения за кобелем в спокойных условиях и в присутствии суки, находящейся в течке. Если тот по-прежнему не проявляет активного либидо или у него не возникает эрекции, то проводят оценку секреции у него тестостерона. Максимальная концентрация тестостерона у нормальных кобелей бывает ниже уровня чувствительности некоторых тестов, применяемых для ее определения. Поэтому необходимо определять концентрацию тестостерона в сыворотке крови кобеля до и после введения гонадотропин-рилизинг гормона или хорионического гонадотропина человека. Недостаточное образование тестостерона редко выявляют у бесплодных кобелей, которые по остальным критериям не имеют отклонений от нормы.
Оценка качества спермы
В конечном счете, самой главной, если не единственной детерминантой плодовитости самца служит качество его спермы. Снижение либидо и способности к спариванию можно преодолеть специальными репродуктивными методами, например, с помощью электроэякуляции и искусственного осеменения. Остается только обсудить подходы к диагностике и лечению бесплодия у кобелей, которые обладают всеми остальными необходимыми для воспроизводства данными, но не могут дать потомство даже при правильной организации проведения вязки с плодовитыми суками, находящимися в течке. От них необходимо взять пробы спермы для цитологического и бактериологического анализов (1,8). Основные параметры, которые определяют при цитологическом исследовании, - число сперматозоидов, их морфология и подвижность, присутствие в эякуляте других клеток. По этим параметрам качество спермы оценивают как нормальное, а также определяют олигозооспермию, азооспермию, тератозооспермию, астенозооспермию, лейкоспермию и гемоспермию (Таблица 5).
Таблица 5. Параметры спермы кобеля
Норма Отклонение от нормы
Объем 2.5- > 80 мл
Цвет Непрозрачная Прозрачная, желтая, красная
Общее число сперматозоидов в эякуляте 300-2,000 х 10 (6) <200х 10(6) олигозооспермия
% активных сперматозоидов > 70 % <50% астенозооспермия
% сперматозоидов с нормальной морфологией > 80 % < 70% тератозооспермия
рН 6.3-6.7
Количество лейкоцитов в поле зрения микроскопа при большом увеличении <6 > 7-10
Здоровая сперма
Кобель здоров. В этом случае осуществляют первичную проверку его племенных качеств. По меньшей мере, дважды осеменяют его спермой суку в оптимальный для оплодотворения период, который определяют по времени овуляции. Если в прошлом у кобеля брали сперму для искусственного осеменения, то следует убедиться в том, что при этом не происходит повреждения половых клеток при их сборе и проведении осеменения (Таблица 6).
Таблица 6. Факторы, негативно влияющие на качество спермы
* Вода
* Смазка
* Пластик
* Латекс
* Холод
* Тепло
* Моча
Оплодотворяющую способность замороженной спермы лучше подтвердить введением ее в матку суки, а не во влагалище. На качество охлажденной или замороженной спермы влияют состав среды, метод разведения (одно- или двухэтапный), конечная концентрация сперматозоидов, температура и скорость охлаждения, замораживания и оттаивания, температура хранения (9-14). Таким образом, здоровые сперматозоиды могут быть повреждены на разных этапах сбора, охлаждения, заморозки, хранения, транспортировки, нагревания и оттаивания спермы, а также при проведении осеменения ею суки.
Второй этап проверки племенных качеств кобеля, сперма которого прошла специальный лабораторный тест, предусматривает осеменение его спермой различных сук, причем относительно хотя бы одной из них должны иметься достоверные данные о ее плодовитости.
Третий этап проверки основан на предположении, что кобель перестал быть бесплодным. Если во время хотя бы одной из проверок эякулят не соответствовал нормативным показателям, проводят повторное тестирование. В случае, когда вновь подтверждается низкое качество спермы, часть ее сохраняют или отсылают в лабораторию для бактериологического анализа, переходя к дальнейшим исследованиям.
Тератозооспермия и астенозооспермия
У сперматозоидов с нарушенной морфологией обычно снижена подвижность. Изменения их морфологии и подвижности могут быть ятрогенными, возникать в результате холодового или теплового шока, сдвигов рН и осмомолярности. Поэтому мы комплексно обсудим эти параметры. Нормальные сперматозоиды совершают быстрые, равномерные движения, которые способствуют их продвижению. Ятрогенные причины наиболее часто уменьшают подвижность морфологически нормальных сперматозоидов. Однако снижение подвижности половых клеток служит также одним из ранних признаков повреждения тестикулов.
К тератозооспермии и астенозооспермии склонны половозрелые и стареющие кобели. Количество измененных сперматозоидов может возрастать, а их подвижность снижается в процессе полового воздержания вследствие обычного старения резервных сперматозоидов, находящихся вне тестикулов. Если эякулят собран лишь в небольшом объеме (1 мл или менее), не следует делать поспешные выводы. Вместо этого надо повторно взять пробу спермы от собаки. Снижение скорости движений здоровых по другим параметрам сперматозоидов обычно служит признаком переохлаждения. Для проверки этой гипотезы микроскопируют часть повторно взятой пробы спермы, помещенной на теплое (37°С) предметное стекло, - здоровые сперматозоиды проявят присущую им подвижность. Норме соответствует прямолинейное и поступательное движение сперматозоидов, и если они двигаются как-то иначе (в сторону хвоста, кругами и тд.), это обычно обусловлено морфологическими дефектами их срединной части или хвоста.
Классификация морфологических изменений сперматозоидов основана на их локализации в головке, срединной части и хвосте последних. Неправильно подобранные рН или осмомолярность краски может вызвать нарушение морфологии половых клеток. В случаях, когда активность сперматозоидов соответствует норме, но их хвост слишком длинен, а срединная часть изменена, следует предполагать, что это вызвано ятрогенной причиной, например, уже упомянутой краской (15) (Рисунки 1 и 2)
Любая травма тестикулов может привести к тератозооспермии.Скрытый текст
Выздоровление в таких ситуациях возможно, если сперматогонии не повреждаются необратимо. Практически в любом эякуляте обычно присутствуют сперматозоиды с морфологическими показателями, отличающимися от нормы. Основываясь на наблюдениях, сделанных при исследованиях спермы быков, обнаружение в сперме кобелей преобладания какого-либо одного морфологического изменения в сперме обычно указывает на генетическое (наследственное), а не приобретенное нарушение, особенно если такое изменение имеют >25% сперматозоидов в исследованных на протяжении продолжительного периода пробах спермы (16). Две такие генетические аномалии, как дефект «Dag» (Рисунок 3) и «обрубленный хвост», описаны у сперматозоидов собак.
У быков при ряде генетических аномалий спермы с возрастом процент сперматозоидов с нарушенной морфологией возрастает. Морфологические аномалии, не имеющие генетической природы, непатогномоничны (17).
Такие нарушения структуры сперматозоида, как капли в дистальной его части или отделение головки от остальных частей клетки, которые морфологически соответствуют норме, относительно слабо влияют на плодовитость кобелей до тех пор, пока их количество не достигает или не становится больше 60% всех сперматозоидов пробы (17). Такой тип аномалий называют «компенсируемым», поскольку они компенсируются большим количеством в эякулятах функционально здоровых сперматозоидов (16). Ряд других описанных у кобелей дефектов структуры сперматозоидов, в т.ч. разрыв срединной части, аномалии головки, отличные от обособления морфологически нормальных головок, и удвоение хвоста, считают более значимыми (17). Они могут носить некомпенсируемый характер.
Олигозооспермия и азооспермия
Количество образуемых сперматозоидов непосредственно зависит от величины тестикулов. Хотя прогноз при олигозооспермии значительно лучше, чем при полном отсутствии сперматозоидов, начальные этапы диагностики этих нарушений не различаются. Неполовозрелые и стареющие собаки предрасположены к олиго- и азооспермии. У здоровых кобелей при ежедневной эякуляции количество сперматозоидов в каждом эякуляте снижается вследствие истощения резервных половых клеток, находящихся вне тестикулов - в придатках тестикулов и семяпроводе (6,8). Если у кобеля за день произошло две эякуляции, во втором эякуляте окажется немного сперматозоидов. Чтобы их количество в сперме было на максимально высоком уровне, необходимо, чтобы между эякуляциями проходило 3-4 дня. При олигозооспермии резерв сперматозоидов может восполняться не столь быстро, как у здоровых кобелей. Однако здоровые сперматозоиды даже в небольшом количестве способны вызвать беременность. Вероятность этого возрастает, если осеменение проводится в оптимальный для оплодотворения период - во время овуляции. Ряд исследователей полагает, что маточное осеменение успешнее влагалищного, а вязка во всех отношениях предпочтительнее влагалищного искусственного осеменения. Снижение объема эякулята почти всегда обусловлено плохой техникой сбора. Однако бывают случаи, когда его причинами становятся ретроградная эякуляция и болезни предстательной железы. Уменьшение объема эякулята может вызвать снижение в нем общего количества сперматозоидов. В норме некоторые сперматозоиды ретроградно перемещаются в мочевой пузырь. Пока не установлено, какие причины заставляют большое количество сперматозоидов осуществлять такую миграцию, но, конечно, следует полагать, что больше половых клеток двигается антероградно через уретру, чем ретроградно в мочевой пузырь. Ретроградную эякуляцию сперматозоидов подтверждают обнаружением их в моче - до и после эякуляции. Рекомендуется лечение а-адренэргическими средствами, которые повышают давление сфинктера уретры (8). У кобелей с таким нарушением, как упоминалось выше, необходимо исключить заболевания предстательной железы. Азооспермия может быть результатом нарушений образования сперматозоидов, эякуляции и сбора фракции эякулята, богатой половыми клетками. Чтобы исключить возможность последнего или прерванной эякуляции, следует определять активность щелочной фосфатазы в полученных пробах спермы. Щелочная фосфатаза образуется в придатках тестикулов. Надо ожидать, что жидкость, выходящая из придатков тестикулов, содержит сперматозоиды и щелочную фосфатазу в высокой концентрации (обычно > 5000 МЕ/л). Азооспермия, сопровождающаяся высокой активностью щелочной фосфатазы спермы, указывает на недостаточность сперматогенеза или двустороннюю непроходимость семявыносящих протоков, препятствующих прохождению сперматозоидов из тестикулов в их придатки. Нарушения образования сперматозоидов имеют врожденный и приобретенный характер. Для постановки окончательного диагноза может потребоваться биопсия тестикулов. Однако предварительно следует провести исследования. Для исключения врожденных нарушений оценивают состояние гипоталамо-гипофизарногонадной гормональной оси; также может быть проведено кариотипирование.
Концентрация щелочной фосфатазы в азооспермийных пробах бывает пониженной по ряду причин. Одна из них обусловлена сбором только первой фракции эякулята (преспермы), которая образуется в предстательной железе. В ряде случаев процесс эякуляции остается незавершенным. Еще одна причина связана с двусторонней непроходимостью семявыносящих протоков, препятствующей прохождению сперматозоидов в придатки тестикулов. Следует также исключить заболевания предстательной железы, так как оба семяпровода проходят через предстательную железу и открываются в предстательном отделе уретры.
Гемоспермия
В большинстве случаев кровь попадает в сперму из предстательной железы или с поверхности пениса при сборе эякулята. Последнюю возможность можно быстро исключить осмотром полового члена, который проводят сразу же после обнаружения крови. Как правило, при травмировании пениса во время сбора эякулята кровь имеет ярко-красный цвет. Кровь, попавшая в сперму из предстательной железы, обычно красновато-коричневая. Такое изменение цвета отмечают во всех фракциях эякулята. Допускается, что в отдельных случаях гемоспермию вызывают поражения препуция, уретры, мочевого пузыря, тестикулов.
Лейкоспермия
Лейкоциты обычно присутствуют в сперме кобелей. Чаще всего они попадают в нее с препуция. Сообщалось о том, что в норме концентрация лейкоцитов в эякуляте не превышает 2000 клеток/мкл или 6 лейкоцитов в одном поле при проведении световой микроскопии проб эякулята, полученных центрифужным методом, при большом увеличеиии (1,8). Другие воспалительные клетки, например, макрофаги, также могут присутствовать в сперме. В каждом случае воспаления пробы спермы следует подвергать бактериологическому исследованию на наличие аэробных и анаэробных бактерий, а также микоплазм (18). С учетом вероятности контаминации спермы микроорганизмами, попадающими в нее с препуция и из мочевого тракта, клинически значимым считают титр аэробных бактерий >10 000 колониеобразующих единиц/мл (8,18). Хотя вероятность столь интенсивной бактериальной контаминации выше в пробах спермы, содержащих большое количество воспалительных клеток, ее регистрируют и у многих собак, в эякуляте которых нет воспалительных клеток. Поэтому высев проб спермы на питательные среды должен быть неотъемлемой частью диагностики независимо от наличия или отсутствия воспалительных клеток в тестируемом материале (18).
Дополнительная информация
Цикл сперматогенеза у кобелей приблизительно равен 62 дням. Изменения качества спермы обычно не проявляются за более короткое время, независимо от того, были ли их первичной причиной ятрогенные факторы или технические погрешности, допущенные при сборе спермы. Установление причин повреждения тестикулов и подтверждения наличия жизнеспособных сперматогониев открывает возможность улучшения или восстановления плодовитости кобелей. Если кобель во всех остальных отношениях здоров, имеет тестикулы нормальной величины и консистенции, рекомендуется повторно проводить оценку качества его спермы через 3,6 и 12 месяцев после первичного тестирования (17). При отсутствии изменений качества спермы в течение 12-месячного периода маловероятно, что те когда-нибудь вновь проявятся.
По материалам журнала "Waltham Focus", "Размножение кошек и собак"